大肠杆菌质粒，大肠杆菌质粒dna的提取实验原理

大肠杆菌质粒，大肠杆菌质粒DNA的提取实验原理

随着分子生物学技术的快速发展，质粒DNA的提取在基因工程、分子诊断等领域中扮演着至关重要的角色。小编将详细介绍大肠杆菌质粒DNA的提取实验原理，帮助读者深入了解这一重要的实验技术。

1.实验目的

1.了解碱法提取质粒的原理：通过实验，使读者掌握碱裂解法的基本原理，为后续的质粒提取实验奠定理论基础。2.掌握碱法提取质粒的方法：通过实际操作，使读者熟练掌握碱裂解法提取质粒的具体步骤，为今后的科研工作提供技能支持。

2.实验原理

2.1质粒抽提方法

质粒抽提方法主要是去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。根据提取产量，可分为微量提取、中量提取、大量提取；根据使用仪器，可分为一般提取和试剂盒方法提取；根据具体操作方法，可分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等。

2.2碱裂解法原理

在强碱性条件下，使质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来，并发生变性而便于纯化出来。市售的大多数试剂盒都是基于碱裂解法原理。碱法抽提适用于小量制备15k以下的质粒DNA。

2.3大肠杆菌类型

大肠杆菌分为两种，一种是引起胃肠道疾病的肠道内大肠杆菌，另一种是肠道外感染的大肠杆菌。肠道内大肠杆菌包括肠致病性大肠杆菌（EEC）、产肠***素大肠杆菌（ETEC）等。

3.碱裂解法提取质粒的步骤

1.细菌培养：将大肠杆菌接种于含有抗生素的L培养基中，37℃培养过夜。

2.细胞裂解：将过夜培养的大肠杆菌离心收集菌体，用无菌的TE缓冲液重悬菌体，加入十二烷基硫酸钠（SDS）和NaOH液，混匀，室温放置5分钟。

3.DNA变性：加入乙酸钾和冰醋酸，使H值调至4.8，混匀，室温放置15分钟。

4.DNA纯化：将混合液加入等体积的异丙醇，混匀，4℃静置30分钟，离心收集沉淀，用70%乙醇洗涤沉淀，干燥后溶解于无菌水中。

4.质粒提取实验中遇到的问题及解决方法

1.未提出质粒或提取质粒得率低：可能是因为细胞裂解不彻底、DNA纯化过程中DNA***失等原因。解决方法：优化实验操作，提高细胞裂解效果，减少DNA***失。2.质粒纯度低：可能是因为杂质未去除干净。解决方法：优化实验操作，提高DNA纯化效果。

通过小编的介绍，相信读者对大肠杆菌质粒DNA的提取实验原理有了更深入的了解。在实际操作中，掌握好实验原理和操作步骤，才能获得高质量的质粒DNA，为科研工作提供有力支持。