pcr原理，等温扩增pcr原理

CR原理，等温扩增CR原理

CR（聚合酶链反应）是一种用于放大特定的DNA片段的分子生物学技术。它广泛应用于基因克隆、基因测序、基因突变分析等领域。小编将详细介绍CR的基本原理，以及等温扩增CR的独特之处。

1.CR技术基本原理

CR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程。它依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物，通过变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。

-变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经CR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链。

退火：降低温度至55℃左右，使引物与单链DNA模板结合。

延伸：在72℃左右，DNA聚合酶从引物的3'端开始延伸，合成新的DNA链。

2.等温扩增CR原理

等温扩增CR（alsoknownasisothermalamlification）是一种在恒定温度下进行的CR技术。与传统CR技术不同，等温扩增CR不需要温度循环，具有操作简便、快速、成本低等优点。

-DNA链分离：等温CR的反应开始时，利用一种称为RTXDNA聚合酶的酶，能够在恒定温度下将DNA的双链分离为单链。

引物结合：引物与目标DNA片段的两端结合。

DNA聚合：DNA聚合酶从引物的3'端开始延伸，合成新的DNA链。

3.等温扩增CR的主要原理

等温扩增CR的主要原理包括以下几个方面：

-DNA聚合酶：等温扩增CR使用的DNA聚合酶具有链置换活性，能够在恒定温度下进行DNA复制。例如，Klenowexo-、suDNA聚合酶和hi29等酶适用于中等温度反应（25–40°C），而st系列酶适用于较高温度反应（50–65°C）。

引物设计：引物设计是等温扩增CR成功的关键。引物应与目标DNA片段的两端互补，以确保扩增的特异性。

反应条件：等温扩增CR的反应条件相对简单，不需要特殊的温度循环设备，降低了实验成本。

4.巢式CR实验原理

巢式CR（NestedCR）是一种基于CR技术的实验方法，用于提高CR扩增的特异性和灵敏度。其原理为根据DNA模板序列设计两对引物，利用第一对引物（称为外引物）对靶DNA进行15-30个循环的标准扩增；第一轮扩增结束后将一小部分起始扩增产物稀释100-1000倍加入到第二轮扩增中，第二轮扩增使用第二对引物（称为内引物）进行，从而提高扩增的特异性和灵敏度。

CR技术和等温扩增CR技术在分子生物学领域具有广泛的应用。了解其原理和操作方法，有助于我们更好地利用这些技术进行科研和生产实践。